NextSeq 500 测序系统
采用illumina边合成边测序技术（SBS），当单个碱基结合DNA链时，通过专利的可逆终止子方法对数百万到数千万个片段进行大规模并行测序。当每个dNTP加入时对荧光标记的终止子成像，随后酶切掉终止子，允许下一个碱基的结合。由于每个测序循环中四种可逆终止子结合的dNTP都存在，所以自然竞争让结合偏差最小化。根据每个循环的信号强度测定检出碱基，与其他技术相比大大降低了原始错误率。
■主要特点：
目前唯一一台可以在一次运行中以高倍的覆盖率（30×）实现全基因组测序的桌面式测序平台，它同样可以在一天内实现以下热门的测序应用：
1) 每次运行1-16个外显子组测序
2) 每次运行1-20个转录组测序
3) 每次运行6-96个靶向测序
4) 每次运行12-40个基因表达样本测序
■适合多种应用，具有前所未有的灵活性
|
应用 |
高通量流动槽 |
中等通量流动槽 |
||
|
样本数 |
时间 |
样本数 |
时间 |
|
|
基因表达谱, >10 M Reads, 1×75 bp |
40 |
11 h |
N/A |
N/A |
|
mRNA-Seq, >40 M Reads, 2×75 bp |
10 |
18 h |
3 |
15 h |
|
捕获富集，12Mb区域，>95%靶向区域，>20×覆盖度 |
N/A |
N/A |
20 |
26 h |
|
全外显子组测序，>90%区域，>10×覆盖度 |
9 |
18h |
3 |
15 h |
|
人全基因组测序，3 Gb基因组，>30×覆盖度，2×150bp |
1 |
29 h |
N/A |
N/A |
■NextSeq 500系统性能参数
|
流动槽配置 |
读长（bp） |
通量 （Gb） |
运行时间 |
起始样本量 |
数据质量 |
|
高通量流动槽 单端400M reads 双端800M reads |
2×150 |
100-120 |
29 h |
100ng-1ug使用 TruSeq样本准备 试剂盒 |
在2×150bp测序时， >75%碱基质量 高于Q30 |
|
2×75 |
50-60 |
18 h |
|||
|
1×75 |
25-30 |
11 h |
|||
|
中等通量流动槽 单端130M reads 双端260M reads |
2×150 |
32-39 |
26 h |
||
|
2×75 |
16-19 |
15 h |
|||
|
运行时间包括在NextSeq 500上的簇生成、测序和碱基识别所需时间 |
|||||
